淀粉分支酶(SBE)試劑盒,微板法

淀粉分支酶(SBE)試劑盒,微板法

淀粉分支酶(SBE)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS9350W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 淀粉分支酶（SBE，EC 2.4.1.18）是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶之一，在淀粉生物合 成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。 SBE 可使底物含量減少，從而降低底物與碘顯色劑形成的在 660nm 有吸收峰的藍(lán) 色復(fù)合物，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映 SBE 酶活性的大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底部，先加 1mL 蒸餾水混合均勻，再徐徐加入煮沸 （95℃）的蒸餾水 5mL，繼續(xù)煮沸 2min， 呈透明溶解狀態(tài)，待冷卻后使用。 試劑三 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 2mL×2 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。 四、淀粉分支酶（SBE）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 660nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 10 10 （95℃煮沸 10min 的酶液） 試劑一 100 100 試劑二 50 50 37℃孵育 10min，沸水浴 2min，流水冷卻至室溫。 試劑三 400 400 試劑四 20 20 混勻，顯色 10min 后，取出 200μL 至 96 孔板中，于 660nm 處讀取 吸光值 A，ΔA＝A 對(duì)照管-A 測(cè)定管（每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管）。 【注】若ΔA 差值較小，可加大樣本量。則改變后的加樣量 V1 需重新代入公式計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每毫克蛋白每降低 1％碘藍(lán)值為本試劑盒僅供科研使用 一個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/mg prot)= ΔA /A 對(duì)照管×99%÷（V1×Cpr）=100×ΔA /A 對(duì)照管÷Cpr 2、按照樣本鮮重計(jì)算： 酶活定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每克組織每降低 1％碘藍(lán)值為一 個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/g 鮮重)= ΔA /A 對(duì)照管×99%÷(W×V1÷V)= 100 ×ΔA /A 對(duì)照管÷W V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； W---樣本質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。 2