Super Fluor 680 琥珀酰亞胺酯

Super Fluor 680 琥珀酰亞胺酯

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1.4.3.1 裝填柱層析分離吸附柱

1) 提前用去離子水浸泡葡聚糖Sephadex過夜(1g 配5mLH2O)，使其溶脹，打開孔狀結(jié)構(gòu)。

2) 濕法裝柱：裝填過程中確保PBS（10mM, pH=7.4）液面比Sephadex高，以防混入空氣而產(chǎn)生氣泡。先在柱子（13×100mm）內(nèi)注入3/4左右的PBS，而后加入Sephadex /PBS溶液；分批次、緩慢加入柱子內(nèi)，后用塑料滴管吸取，沿著柱子四壁旋轉(zhuǎn)，逐步、緩慢地加入，裝填至近滿，留下約3cm的空間以待注入熒光標(biāo)記蛋白溶液。

3) 在裝填的整個過程中打開活塞（淋出液用大燒杯承接），同時用玻璃棒+橡膠塞從下到上輕輕敲打柱子，使Sephadex裝填緊密，注意使柱子內(nèi)不得有氣泡，不得有斷層，使柱子豎直，確保頂部端面水平；故滴加Sephadex時應(yīng)旋轉(zhuǎn)加入，不得直接滴加，以免激起柱頂層。

4) 裝填完柱子后，用塑料滴管吸取PBS，沿管口四壁旋轉(zhuǎn)著緩慢加入，使PBS過一遍柱子，而后將PBS注入Sephadex頂部，以隔絕空氣，以免在柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡，關(guān)閉末端活塞。

1.4.3.2 過柱層析分離吸附柱（避光）

1) 打開柱子末端活塞，緩慢放出柱子頂層的PBS，待PBS液面剛與Sephadex柱子端面相平時，立即關(guān)閉活塞；注意：不要使PBS液面低于Sephadex柱子端面，以免混入空氣而在柱子內(nèi)產(chǎn)生氣泡；立即用塑料滴管吸取熒光蛋白溶液，沿柱子四壁旋轉(zhuǎn)緩慢加入（全部加完）。不要攪動Sephadex ，隨時保持其端面水平。