ecl超敏發(fā)光液的操作步驟

　　方法/步驟1:

　　常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。以下操作在室溫進行。

　　方法/步驟2:

　　新鮮配制發(fā)光工作液。將BufferA和BufferB按1:1比率混合，制成發(fā)光工作液(每25px2膜需要0.125ml發(fā)光工作液)。轉(zhuǎn)移到清潔的塑料小盒中。

　　方法/步驟3:

　　用鑷子將漂洗過的膜取出，將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的洗液，但勿使膜*干燥。將膜轉(zhuǎn)移至有發(fā)光工作液的塑料小盒中，使其*浸泡，輕輕搖晃，室溫孵育幾十秒到1分鐘。

　　方法/步驟4:

　　用鑷子將膜夾起5-10秒，并將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的發(fā)光液，迅速將膜*包裹于潔凈保鮮膜內(nèi)，去除氣泡和褶皺，蛋白面朝上固定于X片暗盒內(nèi)。

　　方法/步驟5:

　　在黑暗中一次重疊放入3張X光膠片，30分鐘或更長時間后全部取出顯影。

　　方法/步驟6:

　　對同一張膜進行多次蛋白雜交：用PBST或TBST洗滌掉發(fā)光液（10min×3次），然后從開始一抗雜交即可。

　　注意事項

　　優(yōu)化一抗和二抗的比例

　　選擇高質(zhì)量的膜

　　ecl超敏發(fā)光液的注意事項

　　1.為獲得*實驗結(jié)果，請務(wù)必優(yōu)化實驗條件，包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇，并且發(fā)光液請現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　2.建議在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質(zhì)量的吐溫-20（終濃度為0.05%），以減少非特異性結(jié)合。

　　3.由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應(yīng)避免使用疊氮鈉作為防腐劑。

　　4.免疫印跡實驗進行全過程中，請確保印跡膜始終處于濕潤狀態(tài)，避免干燥。

　　5.在與膜發(fā)生接觸過程中請佩戴手套或者使用潔凈鑷子，避免蛋白污染。

　　6.實驗過程中，請使用潔凈器材。保證非金屬設(shè)備沒有明顯劃痕，金屬設(shè)備表面無銹。銹可能導(dǎo)致膜上帶有污點或者高背景。

　　以上便是今天關(guān)于在室溫中對ecl超敏發(fā)光液進行實驗操作要注意些什么的全部分享了，希望對大家今后使用本設(shè)備能有幫助。