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驚!原來(lái)核酸染料可以影響瓊脂糖凝膠電泳時(shí)DNA條帶的質(zhì)量
更新時(shí)間:2019-04-24   點(diǎn)擊次數(shù):3119次
     在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),核酸染料,采用“膠染法”的方式進(jìn)行電泳,較大相對(duì)分子質(zhì)量的DNA條帶出現(xiàn)彎曲且有“拖尾”現(xiàn)象,在排除電泳液、瓊脂糖凝膠質(zhì)量和電壓等原因后仍未獲得較好的條帶;而用“后染法”后可獲得較好質(zhì)量的DNA電泳圖。  
    核酸染料可以和核酸分子結(jié)合,在激發(fā)光的照射下發(fā)射熒光,從而指示核酸的位置及大致的含量。高質(zhì)量DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果是亮度適中、無(wú)“拖尾”或彌散現(xiàn)象、條帶單一的信號(hào)。由于DNA瓊脂糖凝膠電泳所需的步驟和試劑多,任何一個(gè)環(huán)節(jié)出錯(cuò)均可能導(dǎo)致電泳失敗。  
    在前期PCR產(chǎn)物電泳時(shí)發(fā)現(xiàn),DNA分子呈條帶扭曲、不同相對(duì)分子質(zhì)量的DNA條帶分界不清和出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象。在降低電壓、重新配制電泳緩沖液、更換電泳儀和電泳槽、更換新批次的瓊脂糖粉末并且請(qǐng)經(jīng)驗(yàn)豐富的科研人員重復(fù)電泳過(guò)程后,均未得到良好的DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果。  
    核酸染料是一種以花青素母體為基礎(chǔ),將苯環(huán)改良成鏈?zhǔn)浇Y(jié)構(gòu)的油性大分子。該染料不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),不易揮發(fā)而被吸入人體,且誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于溴化乙錠,是一種安全無(wú)毒、高靈敏的全新核酸染料。核酸染料含陽(yáng)離子基團(tuán),可以與DNA的陰離子基團(tuán)非共價(jià)結(jié)合,在激發(fā)光照射下發(fā)出熒光,從而指示DNA的位置。  
    核酸染料可以影響瓊脂糖凝膠電泳時(shí)DNA條帶的質(zhì)量。在排除DNA本身質(zhì)量、瓊脂糖凝膠質(zhì)量、電泳液質(zhì)量以及電壓等因素后,若采用“膠染法”進(jìn)行DNA核酸電泳時(shí)出現(xiàn)條帶扭曲或“拖尾”時(shí),應(yīng)考慮到核酸染料質(zhì)量的問(wèn)題。采用“后染法”或更換核酸染料的種類(lèi)可改善DNA電泳條帶的質(zhì)量。
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