木質(zhì)素( Lignin)含量試劑盒,微板法

木質(zhì)素( Lignin)含量試劑盒,微板法

木質(zhì)素( Lignin)含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 木質(zhì)素含量測定說明書 （貨號：WS7170W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 木質(zhì)素是一種含有羥基和甲氧基的高分子芳香族化合物，是苯丙烷的衍生物，作為植物 的化學(xué)成分與纖維素及半纖維素共同形成植物體骨架，大大提高了細胞壁的機械強度，為 植物提供支持，適應(yīng)環(huán)境，抗蟲病害和抗倒伏的生理功能，同時，在木質(zhì)素合成過程中產(chǎn) 生的一些前體物質(zhì)酚類和自由基可以破壞原菌相關(guān)酶類的生物活性與細胞膜的通透性，從 而使植物有一定的自我防御能力。 本試劑盒采用乙?；?，使木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化，其在280nm處有特征吸收峰， 280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 該試劑具有強揮發(fā)性和一定 的毒性，注意在通風(fēng)櫥操作 并且每次用完需密封保存。 試劑二 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔 UV 板、低溫離心機、水浴鍋、移液器、蒸餾水、冰乙酸。 四、木質(zhì)素含量的測定： 1、樣本制備： ① 取適量組織樣本烘干并磨碎，過 40 目篩備用；取 2mg 過篩的粉末組織，加 1.5mL 的 80%乙醇，渦旋振蕩混勻，50℃水浴 20min（間隔 3min 晃動幾下），取出流水冷 卻后，12000rpm，25℃10min，棄上清，留沉淀（盡量保留沉淀）。 ② 向沉淀中加入 1mL 的 80%乙醇震蕩混勻 2min，50℃水浴 20min（間隔 3min 晃動幾 下），取出流水冷卻后，12000rpm，25℃10min，棄上清，留沉淀（盡量保留沉淀）， 95℃烘干沉淀，待用。 2、上機檢測： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，設(shè)置溫度在 25oC，設(shè)定波長到 280nm。 ② 選用螺旋蓋式 2mL 的 EP 管，按照下表加樣： 試劑（μL） 測定管 空白管 樣本制備得到的沉淀 試劑一 （沿管壁緩緩加入） 750 750 混勻，70℃水浴 30min（管口用封口膜封緊或者用重物壓實），隔 15min 輕輕震蕩一次，結(jié)束后自然冷卻至室溫。 （整個操作過程，謹慎操作，注意防護） 試劑二 （沿管壁緩緩加入） 300 300 乙酸 450 450 振蕩充分混勻，總體積為 1.5mL（即為待檢混合液）。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】1.若是木本植物也可考慮添加高氯酸進行乙?；礃颖局苽涞玫降某恋?/span>+750μL 試劑一+30μL 高氯酸（也需緩慢加入，謹慎操作），充分混勻，70℃水浴 30min （整個操作過程同上），加 300μL 試劑二和 420μL 乙酸，總體積仍為 1.5mL， 后續(xù)操作過程同上。 2.若 A 測定管大于 1.8，在最后一步用 96 孔 UV 板檢測時：取 20μL 澄清上清 液+180μL 乙酸至 96 孔板中（空白管也一樣操作），則上清液相當(dāng)于稀釋了 10 倍，則計算公式中的 10 替代 2 參與計算。 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 10.615x - 0.003；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為ΔA。 2、按樣本重量計算： 木質(zhì)素(mg /g 重量)=[(ΔA+0.003)÷10.615]×V1÷W×2 =0.1413×(ΔA+0.003)÷W×2 V1---定容后總體積，1.5mL； 2---至 96 孔 UV 板中檢測時上清液稀釋倍數(shù)； W---樣本重量，1.5mg=1.5×10-3g。 注：由于冰乙酸易揮發(fā)，請混勻后立即測定！ 室溫下 5000rpm 離心 5min，取 100μL 澄清上清液于 96 孔 UV 板中， 再加 100μL 乙酸至 96 孔中，于 280nm 下讀取吸光值 A。分別記為 A 空白管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 空白管。 注：由于冰乙酸易揮發(fā)，可分小批測定（如每次測定 5 個樣本）。