可溶性果膠(WSP)含量試劑盒

可溶性果膠(WSP)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 可溶性果膠(WSP)含量試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS4070F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸等 形式廣泛分布于植物果實(shí)、根莖和葉中。果膠和纖維素以及金屬離子等物質(zhì)相結(jié)合形成不 溶于水的原果膠，在果蔬成熟過(guò)程中轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄怨z，果實(shí)組織也變得軟化、硬度下降。 本試劑盒先提取得到可溶性果膠（WSP），采用咔唑比色法測(cè)定可溶性果膠含量。果 膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成紫紅色物質(zhì)，經(jīng)光譜掃描 該物質(zhì)在 530nm 處有吸收峰，顏色深淺與果膠含量成正比，進(jìn)而得可溶性果膠含量。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（1cm 光徑）、水浴鍋、可調(diào)式移液器、乙醇、濃硫酸、 研缽。 四、可溶性果膠(WSP)含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 取 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.2g），加 2 mL 80%乙醇，研磨勻漿，95℃水浴 25min， 取出流水冷卻后，8000rpm，25℃離心 10min,棄上清，留沉淀， ② 向沉淀中加入 1 mL 80%乙醇混勻，95℃水浴 25min, 取出流水冷卻后，8000rpm，25℃ 離心 10min，棄上清，留沉淀， ③ 再向沉淀中加入 1 mL 蒸餾水混勻，50℃水浴 30min,流水冷卻至室溫，8000rpm，25℃ 離心 10min，棄沉淀，取上清液待測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)為 530nm，蒸餾水調(diào)零； ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱 （µL） 測(cè)定管 空白管 （僅做一次） 樣本 105 蒸餾水 105 濃硫酸 630 630 可用封口膜纏緊，85℃水浴 15min 后， 流水冷卻至室溫。 試劑一 21 21 混勻，室溫（25℃）暗處反應(yīng) 30min（間隔 10min 混勻一次），全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中， 于 530nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定-A 空白。 【注】：1、濃硫酸必須是分析純級(jí)別，且不能長(zhǎng)期開(kāi)口放置，否則影響顯色結(jié)果。另外濃硫酸具有 強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，85℃加熱取出后冷卻再打開(kāi)蓋子，以防液體飛濺燒傷。 2、顯色反應(yīng)必須在暗處反應(yīng)，否則顏色很快消失或者變淡，影響吸光值。本試劑盒僅供科研使用 2 3、若 A 測(cè)定管值大于 1.8，可用蒸餾水稀釋樣本即待檢測(cè)上清液，則稀釋倍數(shù) D 需代入公 式計(jì)算；或若 A 值再零附近可增加樣本取樣質(zhì)量 W。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 2.6619x-0.0141；，x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 是△A。 2、可溶性果膠含量(mg /g 重量) =[(ΔA+0.0141) ÷2.6619×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.37×(ΔA+0.0141)÷W W---樣本重量，g； V---加入提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.105mL； D---稀釋倍數(shù)。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（0.5mg/mL）：臨用前向標(biāo)準(zhǔn)品中加入 2mL 蒸餾水（現(xiàn)配現(xiàn)用）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5. mg/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測(cè)定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。