糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

糖原含量試劑盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 糖原含量測(cè)定說明書 （貨號(hào)：WS1650W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 糖原是由葡萄糖分子通過糖苷鍵聚合而成的高分子物質(zhì)，作為重要的能源物質(zhì)儲(chǔ)存于肝 臟、肌肉和腦等重要器官。糖原的儲(chǔ)存或代謝異常可引起多種疾病，因此測(cè)定糖原含量的 變化，對(duì)研究糖原代謝及相關(guān)疾病有著重要的意義。 采用蒽酮法：即利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，濃硫酸是糖原脫水生產(chǎn)糖醛衍生物，糖醛 類與蒽酮作用，在 620nm 處有吸收峰，再與相同方法處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液比色定量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×2 瓶 4℃保存 用前每瓶甩幾下使粉劑落入底部，再加 10mL 濃硫酸，充分溶解混勻后使用；用 不完的試劑 4℃保存 4-5 天。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 從標(biāo)準(zhǔn)管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管 中，再加 2mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液， 蒸餾水溶解即 再稀釋 1mg/mL 的 50 倍即 0.02mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品備用。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。 四、糖原含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、檢測(cè)液制備： 按照肝臟/肌肉樣本質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：3 的比例加入提取液（如取 0.1g 組織，加 0.3mL 提取液），蓋緊管蓋（用封口膜封口）95℃水解 20min，室溫冷卻 后即為糖原水解液。 ①肝糖原檢測(cè)液：在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體積約 1mL， 8000rpm 室溫離心 5min，取上清液 100μL 至新 EP 管中，再加 900μL 蒸餾水即上清 液稀釋 10 倍后作為檢測(cè)液測(cè)定。 ②肌糖原檢測(cè)液：在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體積約 1mL， 8000rpm 室溫離心 5min，取上清液 200μL 至新 EP 管中，再加 200μL 蒸餾水即上清 液稀釋 2 倍后作為檢測(cè)液測(cè)定。 ③糖原含量低的組織樣本：在冷卻后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸餾水混勻總體 積約 1mL，8000rpm 室溫離心 5min，取上清液作為檢測(cè)液測(cè)定。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm，所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ② 在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 【注】若 A 測(cè)定管值在零附近，可以增加測(cè)定管上樣量 V 檢測(cè)液（如增至 40μL），蒸 餾水相應(yīng)減少，則改變后的 V 檢測(cè)液代入計(jì)算公式計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 糖原含量(mg/g)=(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))÷(V 檢測(cè)液÷V×W)÷1.11×D =0.0018×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V 檢測(cè)液÷V×W)×D V 標(biāo)---0.1mL； V 檢測(cè)液---0.01mL； W--取樣量，g； V---提取液總體積，1mL； C 標(biāo)準(zhǔn)---標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.02mg/mL； D---樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)，肝糖原 D 值為 10，肌糖原 D 值為 2； 1.11---是此法測(cè)得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù)。 試劑名稱 （μL） 空白管 （只做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （只做一次） 測(cè)定管 蒸餾水 100 90 標(biāo)準(zhǔn)液 100 檢測(cè)液 10 試劑一 200 200 200 混勻，置 95℃水浴 5min（蓋緊，防止水分散失），冷卻， 取 200μL 轉(zhuǎn)移至 96 孔板中，于 620nm 讀取吸光值 A。