蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法)

蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法)

蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法)

蔗糖（sucrose）含量（蒽酮比色法）試劑盒說明書 （貨號(hào)：G0506F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 蔗糖是光合作用的主要產(chǎn)物，廣泛分布于植物體內(nèi)，特別是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脫水縮合形成，易溶于水較難溶于乙醇。 在酸性條件下，將蔗糖水解生成果糖和葡萄糖，采用蒽酮比色法，生成的產(chǎn)物在 620nm 下有特征吸收峰，進(jìn)而計(jì)算出蔗糖的含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 2mL×1 支 4℃保存 試劑二 粉劑×2 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 支 4℃保存 臨用前加2mL蒸餾水溶解， 即 0.5mg/mL 蔗糖溶液 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、移液器、研缽、常溫離心機(jī)、 乙醇、濃硫酸、蒸餾水。 四、蔗糖含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉(zhuǎn)移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動(dòng)研磨機(jī)可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 ② 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測(cè)，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ①可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 25℃，設(shè)定波長(zhǎng)到 620nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃；工作液的配制：臨用前在一瓶試劑二中，加入 5.5mL 蒸餾水后， 緩慢加入 14.5mL 濃硫酸，充分溶解（若難溶解，70℃加熱溶解；剩余試劑 4℃保存 一周）。 ③ 上清液稀釋：可先取 2 個(gè)樣本預(yù)測(cè)，確定適合本批樣本的稀釋濃度 D：葉片類樣 本可稀釋 10 倍，含糖量高的果肉類樣本可稀釋 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 60 標(biāo)準(zhǔn)品  2 蒸餾水 60 試劑一 40 40 40 務(wù)必混勻（可用槍吸打混勻），95℃煮沸 10min（蓋緊， 防止水分散失） 工作液 720 720 720 混勻，95℃水浴 10min（封口膜纏緊，防止水分散失）， 冷卻至室溫后，全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中， 于 620nm 讀取吸光值 A，ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】：如果ΔA 大于 2，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù) D。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照重量計(jì)算： 蔗糖含量（mg/g 重量）=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =0.75×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D 2、按照體積計(jì)算： 蔗糖含量(mg/mL 液體)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =0.5×ΔA÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5mg/mL； V---加入提取液體積，1.5mL； V1---加入樣本體積，0.06mL； W---樣本鮮重，g； D---稀釋倍數(shù)。