鈣熒光探針Fluo-8, AM

鈣熒光探針Fluo-8, AM

CAT#：21080

中文名：鈣熒光探針Fluo-8, AM

英文名：1-[2-Amino-5-(6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester

分子式：C51H52N2O23

分子量：1060.30.

性質(zhì)：

1. 外觀：橙紅色粉末

2. 純度：≥90%（HPLC）

3. 產(chǎn)品描述：

Fluo-8, AM是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-8，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-8若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為490nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為514nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。

儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年

4. 操作說(shuō)明（for Human T cells）*
（1） 試劑
2 mM的Fluo-8, AM/DMSO（將1mg Fluo-8, AM溶于442µL DMSO）
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向Fluo-8, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以    防止Fluo-8, AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
②. 用HBSS稀釋Fluo-8, AM溶液，制備4µM的Fluo-8, AM工作液。
③. 將Fluo-8, AM工作液加入細(xì)胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞3次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)490nm，發(fā)射波長(zhǎng)514nm。 
*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定條件。以上方法僅供參考。