Cy標(biāo)記試劑各種花菁染料及其衍生物,常被應(yīng)用于生物分子標(biāo)記,熒光成像及其他熒光生物分析。它們廣泛用于標(biāo)記多肽、蛋白質(zhì)和核酸等。儲存條件:在低于-15℃溫度下冷凍保存,要求儲存環(huán)境干燥并避免光照。
Cy標(biāo)記試劑的操作步驟:
1、在1L0.15MNaCl溶液中透析anti-GST抗體(濃度為0.5mLat3mg/mL),常溫透析4小時。
2、在4°C用新鮮的1L0.15MNaCl溶液再透析過夜。
3、第二天用1L0.1MNaHCO3(pH8.3)透析4小時。
4、用0.22μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。
5、用0.1MNaHCO3稀釋少量的抗體,在280nm處測其紫外吸收值計算標(biāo)記抗體的總量。
6、用DMSO配置Cy3NHS(MW765.95)溶液濃度為10mg/mL;計算所需體積以得到想要的CyDyeNHS和抗體的比值(例如20:1),然后慢慢將其加入到抗體溶液中,同時在暗處常溫緩慢攪拌45分鐘。
7、用1L0.15MNaCl溶液常溫避光透析4小時除去未標(biāo)記上的Cy3。
8、在4°C用新鮮的1L0.15MNaCl溶液再避光透析過夜。
9、用1Lof0.01MPBS/0.01%Sodiumazide溶液常溫避光透析4小時,在4°C常溫避光再次透析過夜。
10、用0.22μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。
11、用0.01MPBS/0.01%Sodiumazide整數(shù)倍稀釋標(biāo)記抗體溶液,測量280nm(蛋白)和552nm(Cy)處的紫外可見吸光度。