DiR染料，DiD，DiO，DiI，DiR和DiS是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）這使得他們可以用來對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。

　　DiR染料的使用方法

　　1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備

　　(1)配置DMSO或EtOH儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。

　　注意：未使用的儲(chǔ)存液保存在-20oC，避免反復(fù)凍融。

　　(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5µM的工作液。

　　注意：工作液的終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找好的條件。

　　2.懸浮細(xì)胞染色

　　(1)懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。

　　(2)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞好的培養(yǎng)時(shí)間不同。

　　(3)染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。

　　(5)重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。

　　3.粘壁細(xì)胞的染色

　　(1)使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

　　(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

　　(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

　　(4)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞好的培養(yǎng)時(shí)間不同。

　　(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

　　以上便是今天關(guān)于DiR染料不是一般的染料，要這么使用才正常的全部分享了，希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。