電泳及RNA定量檢測試劑盒的說明:
1.電泳及RNA定量檢測試劑盒的保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
2.濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少量水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
4.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
5.所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
電泳及RNA定量檢測試劑盒的轉膜操作步驟:
電泳及RNA定量檢測試劑盒轉膜前的RNA瓊脂糖凝膠電泳參照RNA分離中的電泳方法,根據(jù)需要選用適當?shù)姆肿恿俊?nbsp;
1.在一個標準變性凝膠電泳完成后,凝膠用DMPC-H2O淋洗,以除去甲醛,然后用DMPC-H2O稀釋)中浸泡。
2.構建轉移平臺:在塑料盒上橫放一塊玻璃板,玻璃板應比塑料盒長,但比塑料盒窄。剪一塊與盒子等寬但長度是盒子長度2倍的濾紙,將其橫放在玻璃板上,濾紙兩頭垂入盤中,用浸濕濾紙,并向盤中加入足量。
3.用鋒利的小刀將凝膠邊緣無用部分修去,并在靠加樣孔的一放左上角切去一小塊作為凝膠方位的記號。將凝膠置于平臺中央,用玻棒滾動除去氣泡,然后用石蠟膜封住凝膠四周邊緣,避免覆蓋樣品部位。
4.剪一片與凝膠暴露面同樣大小的尼龍膜,在無RNase的水中浸泡5min.,然后將其放置在凝膠上面,膜的一條邊緣應剛好重疊覆蓋于加樣孔的邊緣。膜置于凝膠表面后即不應輕易挪動,膜與凝膠之間不應留有氣泡。
5.取兩張與尼龍膜同樣大小的濾紙,電泳及RNA定量檢測試劑盒用浸濕后置于膜的上方,用玻棒趕出氣泡。切一疊略小于濾紙的紙巾,將其置于濾紙上方,在紙巾上平放一玻璃板,然后在玻璃板上壓一重物,室溫下轉膜4~6小時或4℃過夜。
在轉膜過程中,要保證塑料盤中有足夠的,當紙巾浸濕后,要及時更換。
6.拆卸轉膜裝置,翻轉凝膠和膜使凝膠的一面朝上,置于一張干的濾紙上,用軟鉛筆在膜上標記凝膠加樣孔的位置。
7.取下凝膠,用洗膜,再置于兩張干濾紙上使膜晾干。