CCK-8試劑盒是一種常用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞代謝活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)工具,其主要檢測(cè)原理是基于細(xì)胞代謝活性的變化。CCK-8試劑盒中的CCK-8是一種水溶性的四唑鹽類化合物,其能夠通過(guò)線粒體呼吸鏈的活性被代謝為形成橙色的水溶性產(chǎn)物,該產(chǎn)物可以通過(guò)吸光度檢測(cè)的方式來(lái)間接反映細(xì)胞代謝活性的變化。
1、細(xì)胞接種和處理:首先,將待檢測(cè)的細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿中,并在培養(yǎng)基中添加不同的藥物處理或其他實(shí)驗(yàn)條件,通過(guò)控制實(shí)驗(yàn)條件來(lái)研究細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝活性變化。
2、加入CCK-8試劑:在實(shí)驗(yàn)處理一定時(shí)間后,將CCK-8試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)物中,CCK-8會(huì)被活性細(xì)胞內(nèi)的線粒體呼吸鏈代謝,形成橙色的水溶性產(chǎn)物。
3、檢測(cè)吸光度:將培養(yǎng)皿中的細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至微孔板中,然后使用酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)等設(shè)備測(cè)量吸光度,通常在450納米波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度,橙色產(chǎn)物的光學(xué)密度與細(xì)胞代謝活性呈正相關(guān)。
4、數(shù)據(jù)分析:根據(jù)測(cè)得的吸光度值,可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線或內(nèi)部控制樣品來(lái)計(jì)算細(xì)胞的代謝活性,進(jìn)而分析不同處理?xiàng)l件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的影響。
CCK-8試劑盒基于WST-8還原反應(yīng)的原理,通過(guò)測(cè)定細(xì)胞代謝活性相關(guān)的吸光度值,間接反映細(xì)胞的增殖和存活情況。其優(yōu)點(diǎn)在于其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定可靠,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)等領(lǐng)域的研究中。通過(guò)使用,可以快速、準(zhǔn)確地評(píng)估細(xì)胞的代謝活性,為細(xì)胞生物學(xué)研究提供了重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。